Olio puro di Saposhnikovia divaricata per la produzione di candele e saponi, nuovo olio essenziale per diffusori a bastoncini

breve descrizione:

 

2.1. Preparazione dell'SDE

I rizomi di SD sono stati acquistati come erba essiccata da Hanherb Co. (Guri, Corea). Il materiale vegetale è stato confermato tassonomicamente dal Dott. Go-Ya Choi del Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Un campione di prova (numero 2014 SDE-6) è stato depositato nell'Erbario Coreano delle Risorse Erboristiche Standard. I rizomi essiccati di SD (320 g) sono stati estratti due volte con etanolo al 70% (con riflusso di 2 ore) e l'estratto è stato quindi concentrato a pressione ridotta. Il decotto è stato filtrato, liofilizzato e conservato a 4 °C. La resa di estratto secco dai materiali di partenza grezzi è stata del 48,13% (p/p).

 

2.2. Analisi quantitativa mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)

L'analisi cromatografica è stata eseguita con un sistema HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) e un rivelatore a serie di fotodiodi. Per l'analisi HPLC di SDE, il primoO-lo standard di glucosilcimifugina è stato acquistato dal Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Corea) esec-O-glucosilhamaudolo e 4′-O-β-D-glucosil-5-O-metilvisamminolo sono stati isolati nel nostro laboratorio e identificati mediante analisi spettrali, principalmente tramite NMR e MS.

I campioni SDE (0,1 mg) sono stati sciolti in etanolo al 70% (10 mL). La separazione cromatografica è stata eseguita con una colonna XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). La fase mobile era costituita da acetonitrile (A) e acido acetico allo 0,1% in acqua (B) a una portata di 1,0 mL/min. È stato utilizzato un programma a gradiente multifase come segue: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) e 20–65% A (23–40 min). La lunghezza d'onda di rilevamento è stata scansionata a 210–400 nm e registrata a 254 nm. Il volume di iniezione era 10,0μL. Le soluzioni standard per la determinazione dei tre cromoni sono state preparate ad una concentrazione finale di 7,781 mg/mL (prim-O-glucosilcimifugina), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosil-5-O-metilvisamminolo) e 31,125 mg/mL (sec-O-glucosilhamaudolo) in metanolo e conservato a 4°C.

2.3. Valutazione dell'attività antinfiammatoriaIn vitro

2.3.1. Coltura cellulare e trattamento del campione

Le cellule RAW 264.7 sono state ottenute dall'American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) e coltivate in terreno di coltura DMEM contenente l'1% di antibiotici e il 5,5% di FBS. Le cellule sono state incubate in un'atmosfera umidificata al 5% di CO2 a 37 °C. Per stimolare le cellule, il terreno di coltura è stato sostituito con terreno di coltura DMEM fresco e lipopolisaccaride (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) a 1μg/mL è stato aggiunto in presenza o assenza di SDE (200 o 400μg/mL) per ulteriori 24 ore.

2.3.2. Determinazione dell'ossido nitrico (NO), della prostaglandina E2 (PGE2), del fattore di necrosi tumoraleα(TNF-α) e produzione di interleuchina-6 (IL-6)

Le cellule sono state trattate con SDE e stimolate con LPS per 24 ore. La produzione di NO è stata analizzata misurando il nitrito utilizzando il reagente di Griess secondo uno studio precedente [12]. Secrezione delle citochine infiammatorie PGE2, TNF-αe l'IL-6 è stata determinata utilizzando un kit ELISA (sistemi di ricerca e sviluppo) secondo le istruzioni del produttore. Gli effetti dell'SDE sulla produzione di NO e citochine sono stati determinati a 540 nm o 450 nm utilizzando un Wallac EnVision.™lettore di micropiastre (PerkinElmer).

2.4. Valutazione dell'attività antiosteoartriteIn vivo

2.4.1. Animali

I ratti maschi Sprague-Dawley (7 settimane di età) sono stati acquistati da Samtako Inc. (Osan, Corea) e tenuti in condizioni controllate con un ciclo luce/buio di 12 ore a°C e% di umidità. Ai ratti è stata fornita una dieta da laboratorio e acquaad libitumTutte le procedure sperimentali sono state eseguite in conformità con le linee guida del National Institutes of Health (NIH) e approvate dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Daejeon (Daejeon, Repubblica di Corea).

2.4.2. Induzione dell'OA con MIA nei ratti

Gli animali sono stati randomizzati e assegnati ai gruppi di trattamento prima dell'inizio dello studio (per gruppo). Soluzione MIA (3 mg/50μL di soluzione salina allo 0,9%) è stata iniettata direttamente nello spazio intra-articolare del ginocchio destro sotto anestesia indotta con una miscela di ketamina e xilazina. I ratti sono stati divisi casualmente in quattro gruppi: (1) il gruppo con soluzione salina senza iniezione di MIA, (2) il gruppo con MIA con iniezione di MIA, (3) il gruppo trattato con SDE (200 mg/kg) con iniezione di MIA e (4) il gruppo trattato con indometacina (IM) (2 mg/kg) con iniezione di MIA. Ai ratti è stata somministrata per via orale SDE e IM 1 settimana prima dell'iniezione di MIA per 4 settimane. Il dosaggio di SDE e IM utilizzato in questo studio si basava su quelli impiegati in studi precedenti [10,13,14].

2.4.3. Misurazioni della distribuzione del peso delle zampe posteriori

Dopo l'induzione dell'OA, l'equilibrio originale nella capacità di carico delle zampe posteriori è stato alterato. Un tester di incapacità (Linton Instrumentation, Norfolk, Regno Unito) è stato utilizzato per valutare le variazioni nella tolleranza al carico. I ratti sono stati posizionati con cautela nella camera di misurazione. La forza di carico esercitata dall'arto posteriore è stata mediata su un periodo di 3 secondi. Il rapporto di distribuzione del peso è stato calcolato con la seguente equazione: [peso sull'arto posteriore destro/(peso sull'arto posteriore destro + peso sull'arto posteriore sinistro)] × 100 [15].

2.4.4. Misurazioni dei livelli di citochine sieriche

I campioni di sangue sono stati centrifugati a 1.500 g per 10 minuti a 4 °C; quindi il siero è stato raccolto e conservato a -70 °C fino all'uso. I livelli di IL-1β, IL-6, TNF-αe PGE2 nel siero sono stati misurati utilizzando i kit ELISA di R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) secondo le istruzioni del produttore.

2.4.5. Analisi RT-PCR quantitativa in tempo reale

L'RNA totale è stato estratto dal tessuto articolare del ginocchio utilizzando il reagente TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), retrotrascritto in cDNA e amplificato tramite PCR utilizzando un kit TM One Step RT PCR con SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). La PCR quantitativa in tempo reale è stata eseguita utilizzando il sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Le sequenze dei primer e della sonda sono mostrate nella Tabella.1Aliquote di cDNA campione e una quantità uguale di cDNA di GAPDH sono state amplificate con la miscela master PCR TaqMan® Universal contenente DNA polimerasi secondo le istruzioni del produttore (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Le condizioni di PCR erano 2 minuti a 50 °C, 10 minuti a 94 °C, 15 secondi a 95 °C e 1 minuto a 60 °C per 40 cicli. La concentrazione del gene target è stata determinata utilizzando il metodo Ct comparativo (numero di cicli soglia al punto di incrocio tra il grafico di amplificazione e la soglia), secondo le istruzioni del produttore.

Prezzo FOB:US $0,5 - 9.999 / Pezzo

Quantità minima ordinabile:100 pezzi

Capacità di fornitura:10000 pezzi al mese